Lliçó 1. Característiques generals

Elements genètics accesoris en bacteris. Plàsmids: control de la replicació; transmissió; incompatibilitat. Bacteriòfags: fag lambda; fag M13. Purificació del DNA: DNA cromosòmic; DNA plasmídic; preparació de RNA. Electroforesi d'àcids nucléics. Seqüenciació de DNA: Mètode de Maxam i Gilbert. Mètode de Sanger.

Lliçó 2. Enzims emprats en la tecnología del DNA recombinant

Endonucleases de restricció. Altres enzims útils en la tecnologia del DNA recombinant: DNA polimerases. Polinucleòtido quinasa. Nucleasa S1. RNA polimerasa SP6 i T7. Transcriptasa inversa. Mapes de restricció.

Lliçó 3. Tècniques d'hibridació d'àcids nucléics I

Marcatge de sondes: trasllat de l'osca (nick translation); iniciació a l'atzar (random priming); síntesi de sondes de RNA; marcatge amb polinucleòtido quinasa. Tècniques d'hibridació en filtre: Southern i hibridació "in situ" de plàsmids i fags.

Lliçó 4. Tècniques d'hibridació d'àcids nucléics II

Northern i hibridació "in situ" de RNA. Control de la hibridació entre dos àcids nucléics. Mapeig de RNAs per protecció a nucleases. Assaig de transcripció (run-on). Reacció en cadena de la polimerasa (PCR).

Lliçó 5. Tècniques de clonatge de gens

Vectors de clonatge: fags lambda d'inserció; fags lambda de reemplaçament; plàsmids; còsmids. Genoteques: genoteques genòmiques; genoteques de cDNA. Mètodes d'aïllament de clons d'una genoteca.

Lliçó 6. Mutagènesis "in vitro"

Mutagènesi "in vitro" i funció gènica. Importància de les enzims de restricció. Mapeig d'un transposó bacterià. Anàlisi de promotors. Mutagènesi i oligonucleòtids sintètics. La PCR i la construcció de gens que codifiquen proteïnes quimèriques.

Lliçó 7. Transferència de gens en cèl.lules de mamífers

Cultius cel.lulars. Transferència gènica i virus tumorals. Transferència gènica per cotransformació. Amplificació gènica. Vectors virals. DNA i RNA antisentit. La recombinació homóloga i la inactivació de genes cel.lulars.

Lliçó 8. Enginyeria genètica de plantes

Plásmid Ti de Agrobacterium. Vector génic DNA-T. Vectors virales. Transferència de DNA en les plantes. Orgànuls cel.lulars transgènics. Clonació de gens mitjançant elements transponibles. Arabidopsis com a model d'estudi.

Lliçó 9. Oncogens i anti-oncogens

El càncer com a malaltía genètica. Oncogens. Proto-oncogens. Clonació d'un oncogen humà activat. Gens supressors de tumors. Retinoblastoma. Gen P53. El càncer com a resultat de l'accumulació de mutacions dominants i recessives.

Lliçó 10. Aplicacions industrials del DNA recombinant

Expressió de proteïnes en cèl.lules d'organismes. Vacunes. Anticossos monoclonals. Drogues recombinants. Introducció de DNA en plantes. Adquisició de resistència en les plantes. Animals transgènics. Animals resistents a malaltíes.

Lliçó 11. DNA recombinant i SIDA

El virus de la immunodeficiència humana (HIV). El genoma del HIV. Gens característics del HIV. Teràpia contra el HIV. Desenvolupament de vacunes. Sarcoma de Kaposi.

Lliçó 12. Teràpia gènica

Correcció de defectes gènics en animals transgènics. Consideracions ètiques de la teràpia gènica en humans. Correcció de defectes genètics "in vitro". Vectors cel.lulars per a la teràpia gènica. Teràpia gènica "in vivo". La teràpia gènica en els essers humans.

Lliçó 13. DNA recombinant i Evolució

El món del RNA. Paper dels introns en l'evolució. Elements mòbils i evolució genòmica. La duplicació gènica en l'evolució. Evolució dels primats. DNA mitocondrial com a rellotge molecular. Origens dels orgànuls intracel.lulars. Bases genètiques de l'altruïsme.

BIBLIOGRAFIA

LEWIN, B. (1994). Genes V. John Wiley and Sons. Hi ha una versió en castellà de Genes III: Genes. Ed. Omega.

OLIVER, S.; WARD, J.M. (1985). A Dictionary of Genetic Engineering. Cambridge University Press.

NICHOLS, D.S. (1994). An Introduction to Genetic Engineering. Cambridge University Press.

SERRANO, J.L.; GARCIA LOBO, J.M. (1990). Manual de Genética Molecular. Ed. Síntesis.

SMITH, C.A.; WOOD, E.J. (1991). Molecular Biology and Biotechnology. Chapman and Hall, New York

WATHERALL, D.J. (1991). The New Genetics and Clinical Practice. Oxford University Press.

WATSON, J.D.; HOPKINS, N.H.; ROBERTS, J.W.; STEITZ, J.A.; WEINER, A.M. (1987). Molecular Biology of the Gene. Fourth Edition. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Menlo Park, California 94025.

WATSON, J.D.; GILMAN, M.; WITKOWSKI, J.; ZOLLER, M. (1992). Recombinat DNA. Second Edition. W.H. Freeman and Co., New York.