Departament de Genètica

Asignatura de Principios Básicos de Ingeniería Genética

PROGRAMA - CURSO 1995-96 (PLAN NUEVO)

Tema: 1

Introducción. Ingeniería genética: concepto, objectivos y aplicaciones.

MANIPULACION DEL DNA

Tema: 2

Métodos de purificación de ácidos nucleicos. Preparación de DNA genómico procariota y eucariota. Preparación de DNA de plasmidios y fagos. Purificación de RNA

Endonucleasas, exonucleasas y DNA polimerasas útiles en Ingeniería Genética. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Hidrólisis ácida y alcalina de los ácidos nucleicos.

Enzimas de restricción. Digestiones del DNA y mapaje de restricción. Electroforesis de DNA y RNA en agarosa y acrilamida. Electroforesis de campo pulsante.

Métodos de fragmentación y enlace de las moléculas de DNA. Fragmentación mecánica y fragmentación enzimática. Acción de las ligasas y métodos de enlace de las moléculas fragmentadas (inkers i adapters).

Los transposones como instrumento en ingeniería genética. Mutagénesis con transposones. Reordenaciones genéticas con transposones. Fusiones génicas.

CLONAJE DEL DNA

Tema: 7

Clonaje de DNA. Tipos de vectores: plasmidios, bacteriófagos y sus derivados. Características de los plasmidios naturales. Plasmidios artificiales más utilitzados: pBR322 y pUC. Vectores de expressión. Técnicas de transformación.

Bacteriófagos. Los fagos filamentosos: M13 y sus derivados. Fagsmidios. El fago l com vector de clonación y de expressión. Vectores l de substitución y de inserción. Empaquetamiento in vitro y infección.

Vectores para el clonaje de fragmentos grandes de DNA. Cosmidios y su utilitzación. YACs.

Construcción de genotecas. Construcción de librerias de cDNA. Estrategias de selección de clones: screening por hibridación de ácidos nucleicos y por métodos immunoquímicos. Selección por complementación fenotípica.

HIBRIDACION Y SECUENCIACION DE DNA

Tema: 11

Estrategias de marcaje de moléculas de DNA. Marcajes uniformes. Marcaje de extremos. Marcaje radioactivo. Detección del marcaje radioactivo. Marcaje no-radioactivo: biotina y digoxigenina. Métodos de detección: colorimétrico y luminiscente.

Hibridaciones sobre filtro. Acidos nucleicos: técnica de transferencia Southern y Northern. Dot blots de DNA y RNA. Proteínas: Western y dots. Mapaje de restricción y Southern.

Hibridaciones "in situ": localitzación de DNA's y RNA's sobre material biológico. Hibridaciones sobre cromosomas politénicos y cromosomas mitóticos. Hibridaciones a secciones tisulares y organismos enteros.

Secuenciación del DNA. Método de Sanger. Técnicas actuales de secuenciación. Método de Maxam y Gilbert.

CARACTERITZACION DE LA EXPRESION DE GENES

Tema: 15

Elementos de un gen eucariota: mapaje de exones y intrones. Caracteritzación de los transcritos de un gen. Mapaje del inicio de transcripción y del final de transcripción. Técnicas de digestión S1 y Primer Extension.

Determinación de promotores y factores de transcripción. Elementos de regulación en cis y en trans. Retraso en gel y footprinting.

APLICACIONES DE LA INGENIERIA GENETICA

Tema: 17

Expresión heteróloga de proteínas. Sistemas de expresión en bacterias y levaduras. Síntesis de proteínas de interés industrial y terapéutico.

Mutagénesis dirigida (SDM). Técnicas de heterodúplex y técnicas de cassette. Ingeniería de proteínas: aplicaciones prácticas.

Animales transgénicos. Concepto de Terapia Génica. Plantas transgénicas.

Comentarios: silvia@porthos.bio.ub.es Última actualitzación: 2 de julio de 1996